羟自由基测定试剂盒到货了，欢迎选购


一、测定原理

Fenton反应是zui常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的OH.量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH.的多少呈正比关系。

二、试剂组成与配制：（50T/48样）

试剂一：3%H2O2标准品储备液0.5ml×1支，4℃保存3个月。0.03%标准品应用液的配制：3%H2O2标准储备液：蒸馏水=1：99稀释，现用现配。

试剂二：底物储备液1ml×1支，4℃保存3个月。

试剂三：甲液储备液2ml×1支，4℃保存3个月，用时加蒸馏水1：9稀释成应用液。
乙液7ml×2支，4℃保存3个月。

试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比例混合，用多少配多少，余下4℃保存。

试剂四：液体10ml×1瓶，用时加蒸馏水稀释至100ml，制备成应用液，4℃保存。若有结晶，则放置37℃水浴至全部溶解后再稀释。

试剂五：液体30ml×1瓶，避光4℃冰箱保存.

试剂六：液体30ml×1瓶，避光4℃冰箱保存.

试剂七：分析纯的冰乙酸（冰醋酸）自备。

显色剂的配制：试剂四应用液：试剂五：试剂六：冰乙酸=8：3：3：2，需多少配多少，现用现配。

注：抑制羟自由基的物质如：血清（浆）、各种组织匀浆液、口服液等；

产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。

三、操作：

以上配制好的应用液，先37℃水浴中预温3分钟，以下操作在37℃水浴中进行。


*：参考取样量：血清(浆)样本用生理盐水20倍稀释后取0.2ml作检测；若您有微量移液器，可直接取0.010ml

血清（浆），再加0.190ml生理盐水。组织匀浆上清，取0.2ml检测。具体取样量需您自己做预试确定，详细预试方法见附录。

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四、计算公式：

1、血清计算公式：

定义：规定每毫升血清（浆）在37℃下反应1 分钟，使反应体系中H2O2 浓度降低1mmol/L

为一个抑制羟自由基能力单位。

抑制羟自由基能力（U/mL）=(对照OD 值-测定OD 值）/（标准OD 值-空白OD 值）×标准品

浓度（8.824mmol/L）×(1mL/取样量) ×样本测试前稀释倍数

2、组织计算公式

定义：规定每毫克组织蛋白在37℃下反应1 分钟，使反应体系中H2O2 浓度降低1mmol/L 为

一个抑制羟自由基能力单位。

抑制羟自由基能力（Uprot）=(对照OD 值-测定OD 值）/（标准OD 值-空白OD 值）×标

准品浓度（8.824mmol/L）÷[待测样本蛋白浓度（mgprot/mL）×取样量（0.2mL）]


3、产生羟自由基能力的计算公式：

定义：规定每毫升或每毫克物质或每立方厘米内106 个细胞在本反应体系中使反应液中H2O2

浓度增加1mmol/L 为一个抑制羟自由基能力单位。

抑制羟自由基能力（U/mL）=(测定OD 值-对照OD 值）/（标准OD 值-空白OD 值）×标准品

浓度（8.824mmol/L）×(1mL/取样量) ×样本测试前稀释倍数

五、注意点：

1.       必须每一支管子单独做，并且反应时间一分钟一定要准确。

2.       必须严格按照操作表顺序加试剂，不可配制混合试剂。

3.       检验样本溶剂或介质可为生理盐水、蒸馏水、醋酸、无水乙醇，但不能为磷酸缓冲液。

4.       此法检测灵敏度较高，检测血清（浆）和组织以外样本时，先取原液及不同浓度稀释后的样本，

例如5倍稀释液或10倍稀释液做预试。如测定管颜色太浅可将样本用其溶剂继续稀释至颜色深为止。

我所曾检测花粉的水提液的活性氧，将其原液稀释150倍后，显色较好。

 

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