甘油含量检测试剂盒-甘油浓度测定

甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，但检测更方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法和经典GPO-Trinder酶学反应相结合的方法，通过比色法测定液体样本中的甘油含量。经过优化后，操作步骤更加简单，检测线性范围在10-1200µmol/L，可靠性和重复性俱佳，适合生物医学、食品实验室检测。

甘油浓度测定：

参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致，减小实验误差，可先加入标准品、待测样品，然后再加入工作溶液。（注意：当甘油浓度较低时，可将待测样品与工作溶液按照100µl:100µl体积混合，然后再进行测定，但是如果样品体积超过100µl时将会稀释工作液中酶的浓度，使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过线性范围，可进行适当稀释，然后根据稀释倍数来计算样品中甘油浓度。）

37ºC或25ºC反应 10分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。

先用蒸馏水+工作液的空白管调零，然后测定各管OD值。

绘制标准曲线并计算甘油浓度。

附Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2值-。

说明：

1、维sheng素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、二硫苏糖醇、巯基乙醇、高浓度EDTA干扰测试。

2、正常血清甘油浓度为20-130µmol/L，细胞培养时须用不含酚红的无色无血清培养基，如果培养基中含有酚红，可以选择含有酚红的无细胞培养基作为对照进行测定

强碱条件下甘油和二价铜的络合物显绛蓝色，所以利用甘油的这个特性就可以轻松搞定。主要试剂是AR级的甘油、氢氧化钠、硫酸铜。向氢氧化钠碱化的甘油溶液里加硫酸铜，一定要保证甘油被*络合，并且保证多余的二价铜都以氢氧化铜沉淀形式存在，但是氢氧化钠也不要加太多。甘油铜可见区大吸收波长是在630nm。先作个标准系列，绘出吸光度-浓度曲线，然后把待测试样吸光度测出来在标准曲线上一算，浓度就得到了。